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用帖壁法純化巨噬細(xì)胞

更新時間:2021-07-13點(diǎn)擊次數(shù):1644

1. 用含 20 %~ 40 %小牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)液將巨噬細(xì)胞配成 2 × 106 ~ 4 × 106 /ml 的濃度。以每平方厘米 2 × 105 ~ 4 × 105 個巨噬細(xì)胞的密度將細(xì)胞懸液接種到玻璃培養(yǎng)皿(瓶)或塑料培養(yǎng)皿(瓶)中。 37 ℃ 5 % CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1 小時或 24 小時。 1 小時培養(yǎng)節(jié)省時間但會丟失一些粘附力弱的巨噬細(xì)胞,而 24 小時可以得到較多的巨噬細(xì)胞。 20 %~ 40 %的小牛血清可以減少 B 淋巴細(xì)胞的粘附。

2. 搖晃培養(yǎng)皿(瓶),懸浮未粘附細(xì)胞,吸出細(xì)胞懸液。用預(yù)溫的 Hanks 液洗滌細(xì)胞 3 ~ 4 次。懸浮細(xì)胞可重復(fù)粘附,得到更多巨噬細(xì)胞。用適量含 2.5mmol/L EDTA 的無鈣鎂 Hanks 液消化細(xì)胞 37 ℃ 15 ~ 30 分鐘。用吸管吹打分離細(xì)胞,離心 250 × g 10 分鐘,去上清液。

3. 用預(yù)冷的 Hanks 液洗滌細(xì)胞 3 ~ 4 次,每次離心 250 × g 10 分鐘,去上清液。最后用含 10 %小牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞并決定細(xì)胞活力,將細(xì)胞配成所需的濃度。


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